mRNA疫苗研究明星爆品——T7 RNA聚合酶

更新時(shí)間：2021-12-03 點(diǎn)擊次數(shù)：2139

T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌體DNA編碼的酶，對(duì)T7啟動(dòng)子序列具有高度特異性。本酶是依賴于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化單鏈或雙鏈DNA T7啟動(dòng)子下游NTP的摻入，合成與T7啟動(dòng)子下游的模板DNA互補(bǔ)的RNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
該酶對(duì)T7啟動(dòng)子具有高度特異性，不識(shí)別其它生物來源的啟動(dòng)子?？梢宰R(shí)別修飾的核苷酸，例如生物素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、放射性同位素、地高標(biāo)記dNTP，用于各種標(biāo)記RNA的合成，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量保證：
1.SDS-PAGE膠檢測(cè)僅可見清晰單一的目的條帶，毛細(xì)管電泳檢測(cè)純度在95%以上；
2.酶動(dòng)力學(xué)實(shí)時(shí)熒光法顯示無DNA酶及RNA酶污染；
3.光度測(cè)定法顯示內(nèi)毒素含量≤10 EU/mg。

純度驗(yàn)證

RNA酶殘留定量檢測(cè)

T7 RNA聚合酶	RFU值	RFU平均值	CV%	Ratio
DNA酶殘留定量檢測(cè)
T7 A	6730	7112.5	16.914	6.65
	7495
T7 B	6188	6204	0.731	5.8
	6220
T7 absin	5991	6218	10.352	5.81
	6445
RNA酶殘留定量檢測(cè)
T7 A	18726	17918	6.3773	1.1
	17110
T7 B	53599	41543.5	41.039	2.56
	29488
T7 absin	22545	21289.5	8.34	1.31

應(yīng)用實(shí)例
【RNA體外轉(zhuǎn)錄合成】
1. 在RNase free的離心管中加入右側(cè)表格中各組分配制反應(yīng)體系
2. 將上述反應(yīng)液混合均勻，低速離心至管底，37℃孵育4個(gè)小時(shí)。若轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度小于100 nt,增加反應(yīng)時(shí)間至4-8個(gè)小時(shí)；
3. 轉(zhuǎn)錄后取樣品進(jìn)行凝膠電泳，取樣1µL稀釋到5 µL,然后用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測(cè)，以確定轉(zhuǎn)錄是否成功.
4. 反應(yīng)完成后，加入DNase 1 (RNase free) , 37 ℃孵育30 min以去除模板DNA.
注：
(I)為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄，建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5‘突出末端.
(2)反應(yīng)體系于室溫配置。由于10xTranscription Buflfer中含有亞精胺，低溫下亞精胺濃度過高容易引起DNA模板沉淀，建議最后加入模板DNA.
(3)建議在PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，為防止蒸發(fā)，建議開啟熱蓋功能.
(4)使用試劑、容器等無RNA酶污染。

組分	體積
DNase RNase-Free Water	Up to 20 µL
ATP/CTP/GTP/UTP(100mM each)	2µL each
10x Transcription Bufler	2 µL
DNA template	0.5-2µg
RNase Inhibitor (40 U/µL)	0.5 µL
Inorganic PyTophosphatase(0.1U/µL)	0.5µL
T7RNA Polymerase (1000 U/µL)	0.2 ~ 1 µL
Mg2+ (400 mM)	1 µL
Total Volume	20 µL

產(chǎn)品信息

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
abs60153	T7 RNA 聚合酶	50KU/200KU/1000KU

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