正確處理樣本是保證ELISA檢測正確性和準確性重要步驟

   通常我們用ELISA來檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步。

　　1.血清

　　血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出）。4℃1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

　　采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

　　2.血漿

　　ELISA實驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

　　3.細胞培養(yǎng)上清

　　取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

　　4.細胞裂解液

　?。?）吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。

　?。?）收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。

　?。?）加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。

　?。?）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。

　?。?）4℃10000×g離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。