如何將自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象運用到報告基因中？

對于自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象，大家應(yīng)該都是比較熟悉的，其廣泛存在于海洋生物、微生物和陸生生物中。生物發(fā)光現(xiàn)象其實是在生物體內(nèi)由于生命過程中由化學(xué)反應(yīng)介導(dǎo)的將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能所產(chǎn)生的，這其中起到主要作用的是一種叫熒光素酶的物質(zhì)。熒光素酶是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，具有代表性的是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，被廣泛應(yīng)用到生物學(xué)的報告基因中——一類可以編碼熒光蛋白或酶，從而將看不見的底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光或彩色產(chǎn)物的一類基因報告系統(tǒng)，光信號可通過發(fā)光檢測儀或CCD相機進(jìn)行檢測，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究的一個重要工具，廣泛應(yīng)用于檢測細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)。

螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶雖然同屬于熒光素酶，但是它們的來源及發(fā)光原理、發(fā)光顏色、檢測波長等都不盡相同。

表1 兩種熒光素酶作用原理的區(qū)別

螢火蟲熒光素酶發(fā)光原理：

海腎熒光素酶發(fā)光原理：

利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特性，可以把感興趣的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆在熒光素酶基因的上/下游，構(gòu)建成熒光素酶報告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，經(jīng)適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調(diào)控元件的影響。

圖2 熒光素酶報告基因檢測流程圖

由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的底物和發(fā)光顏色不同，并且易于定量，檢測靈敏度高，所以在雙報告基因?qū)嶒炛械玫綇V泛應(yīng)用。在雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)中螢火蟲熒光素酶一般是作為主報告基因， 海腎熒光素酶通常作為內(nèi)參報告基因，來標(biāo)定檢測用報告基因的測量結(jié)果，從而達(dá)到有效地減少實驗誤差的目的。

愛必信雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒為檢測基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個樣品中依次檢測。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 兼容性好：本試劑盒的光信號可以兼容化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。
? 準(zhǔn)確性高：系統(tǒng)包含海腎熒光素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率、以及細(xì)胞生長狀態(tài)造成的誤差，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
? 抗干擾性強：無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾。

除以上介紹的雙熒光素酶報告試劑盒外我們提供多種熒光素酶檢測試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑盒，以滿足不同用戶的使用需求。具體信息如下：