RNA提取之Trizol法

在分子生物學研究中，RNA提取是非常重要的基礎步驟，而提取效率和純度直接影響后續(xù)實驗的成功。Trizol試劑是一款高效、可靠的核酸提取試劑，為科研人員提供專業(yè)解決方案。

Trizol產品特點：

1、高效提取RNA

Trizol試劑基于經典的酸性酚-氯仿分離法，可從細胞、組織、植物等多種樣本中快速提取高純度的RNA?？蓾M足多種實驗需求，省時高效。

2、高純度

提取的RNA具有較高的純度和完整性，A260/280值通常在1.8-2.0，wan全滿足分子生物學實驗的要求。

3、適用范圍廣

樣本類型：適用于細胞、組織、細菌、酵母和病毒等多種樣本。

下游實驗：提取的核酸可直用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質量要求較高的實驗，保證結果的準確性和可靠性。

需要的試劑

需要的耗材

操作步驟：

1、細胞裂解

★ 組織樣本

Trizol用量：每50-100mg組織加1mL Trizol，樣品體積不應超過Trizol體積的10％。

（1）將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理；

（2）將研磨好的組織粉末快速轉入裝有1mL Trizol的2mL離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上， 待所有的樣品研磨完；

（3）裂解產物應呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結節(jié)部位等，勻漿后仍會存留有不溶物質，可于4℃ 12,000xg離心10min，然后吸取上清至一新的離心管中。

★ 細胞樣本

（1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm2培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1mL Trizol，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞wan全裂解，然后轉移至離心管中；

注：Trizol的使用量應由培養(yǎng)皿表面 積決定，而非由細胞數(shù)目決定。Trizol量不足可能導致提取的RNA中有DNA污染。

（2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5-10×10⁶動植物或酵母細胞，或每1×10⁷細菌細胞加入1mL Trizol， 用加樣器吹打，使其wan全裂解，然后轉移至離心管中。

注：添加Trizol前切勿洗滌細胞 ，以免RNA降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞。

2、液相分離

（1）裂解產物于室溫放置5min，使核酸-蛋白復合物wan全分離（注：此時樣品可在-80℃長期保存）；

（2）每1mL Trizol加入0.2mL氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，室溫放置2-3min；

（3）4℃ 12,000xg離心15min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相，中間層和無色的上層水相；

（4）吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，吸取水相的體積為所用Trizol試劑的60％。

3、RNA回收

（1）按照每1mL Trizol的最初使用量加入0.5mL異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10min；

（2）4℃ 12,000xg離心10min，棄除上清，可見膠狀的RNA沉淀；

（3）按照每1mL Trizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀；

（4）4℃ 12,000xg離心5min，棄除上清；

（5）室溫倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機，以免RNA過干，難以溶解）；

（6）加入適量（如25uL） DEPC-ddH₂O或TE緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA；

（7）通過RNA電泳以及紫外分光光度計檢測，確定RNA的濃度、純度和完整性；

（8）所得的RNA應立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。

僅需幾步操作，即可得到高質量的RNA，簡便且高效。除Trizol(abs60154)外，Absin還有Trizol（總RNA抽提試劑盒）(abs9331)包含有RNA提取全流程的試劑。

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