Nature子刊力證：牛磺酸精準(zhǔn)檢測(cè)方案，解鎖疾病研究新機(jī)制

背景介紹

?；撬幔?-氨基乙磺酸）是半胱氨酸的脫羧產(chǎn)物，是動(dòng)物體內(nèi)很豐富的游離氨基酸之一，具有膜穩(wěn)定、神經(jīng)傳遞和炎癥等多種生理功能。它普遍分布在哺乳動(dòng)物組織中，特別是心臟、大腦和白細(xì)胞中。

研究發(fā)現(xiàn)，?；撬嵩诙喾N腦損傷模型中可能表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)作用，包括缺血性腦卒中和炎癥。此外，?；撬嶙鳛楹茇S富的氨基酸之一，可以重塑腸道菌群，增強(qiáng)抗感染能力，增強(qiáng)抗腫瘤免疫力。牛磺酸在疾病治療的潛在影響是一個(gè)越來(lái)越受關(guān)注的領(lǐng)域。

?；撬岷繖z測(cè)在科學(xué)研究中的應(yīng)用

一、肥胖治療研究：生酮飲食誘導(dǎo)的膽汁酸通過(guò)減少卡路里吸收來(lái)預(yù)防肥胖

在這篇題為《Ketogenic diet-induced bile acids protect against obesity through reduced calorie absorption》的研究中（IF：18.9），?；撬岷繖z測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)小鼠血清中的游離?；撬崴剑▓D1），驗(yàn)證生酮飲食（KD）或甲硫氨酸補(bǔ)充飲食（KDM）對(duì)血清游離牛磺酸含量的影響，進(jìn)而排除游離?；撬岷孔兓瘜?duì)牛磺酸結(jié)合膽汁酸（如 TDCA、TUDCA）循環(huán)的干擾。

圖1  血清游離?；撬崴剑ǜ鹘M進(jìn)行五次生物學(xué)重復(fù)）^[1]。

二、動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血（aSAH）治療研究：?；撬嵬ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)GABAB/AKT/GSK 3β/β-catenin途徑減輕蛛網(wǎng)膜下出血后神經(jīng)元鐵性下垂

在這篇題為《Taurine attenuates neuronal ferroptosis by regulating GABAB/AKT/GSK3β/β-catenin pathway after subarachnoid hemorrhage》的研究中（IF：8.101），?；撬岷繖z測(cè)試劑盒 用于定量分析人腦脊液（CSF）中的牛磺酸濃度，是研究的關(guān)鍵起點(diǎn)之一。研究者發(fā)現(xiàn) SAH 患者腦脊液中的牛磺酸水平顯著低于對(duì)照組（圖2）。這一結(jié)果為后續(xù)研究提供了臨床依據(jù)，說(shuō)明?；撬峥赡芘c SAH 后的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制相關(guān)。

圖2  正常人和SAH患者CSF樣本中?；撬岬乃?sup>[2]

三、炎癥性腸病 （IBD）治療研究：上皮NSD2維持FMO介導(dǎo)的?；撬嵘锖铣桑乐鼓c道屏障破壞

在這篇題為《Epithelial NSD2 maintains FMO-mediated taurine biosynthesis to prevent intestinal barrier disruption》的研究中（IF：7.9），?；撬岷繖z測(cè)試劑盒用于定量分析?；撬嵩谀c道上皮細(xì)胞（IECs）和細(xì)胞系中的濃度變化（圖3），確認(rèn)NSD–H3K36me2–FMO–taurine 通路的存在。證明?；撬嵩诰S持腸道屏障和抗炎中的重要作用，為牛磺酸作為IBD潛在治療策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

圖3 使用?；撬嵛鍣z測(cè)試劑盒（n = 4）確定了Nsd 2Vil-KO和Nsd 2Vil-OE小鼠及其同窩小鼠（經(jīng)過(guò)或不經(jīng)過(guò)DSS處理）的內(nèi)膜異位癥中牛磺酸的水平^[3]。

接下來(lái)，小愛(ài)給大家詳細(xì)介紹?；撬釞z測(cè)試劑盒使用方法

一、試劑盒組分

二、操作步驟：

1、材料和試劑準(zhǔn)備

自備材料：酶標(biāo)儀、蒸餾水、移液器與槍頭、研缽、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器、烘箱等。

染料工作液：使用前將0.6mL染料試劑B加入到染料試劑A中，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液：向標(biāo)準(zhǔn)品粉末中加入 1mL 蒸餾水充分溶解；取 0.5mL 溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入 0.5mL 蒸餾水混勻，最終濃度為 10mmol/L。

注意：試劑盒中的染料易氧化變質(zhì)，使用前現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完，不建議長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

2、樣本處理

（1）細(xì)胞/細(xì)菌樣本：將細(xì)胞或細(xì)菌收集至離心管中，離心后棄去上清；向每5×10?個(gè)細(xì)胞/細(xì)菌樣本中加入0.75mL檢測(cè)緩沖液I，進(jìn)行超聲破碎（功率20%，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；隨后加入0.25mL檢測(cè)緩沖液II，以10,000×g離心10分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中待檢測(cè)。

（2）組織樣本：稱(chēng)取0.1g組織，加入0.75mL 檢測(cè)緩沖液 I 勻漿，40℃水浴孵育30分鐘，加入 0.25mL 檢測(cè)緩沖液 II，10,000×g 離心 10 分鐘；取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，待檢測(cè)。

（3）血清/血漿樣本：可直接檢測(cè)，或用蒸餾水稀釋后檢測(cè)。

3、上樣

按照如下表格加樣

注意事項(xiàng)：

（1）需對(duì)最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行2倍連續(xù)梯度稀釋?zhuān)?-8個(gè)點(diǎn)左右），以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）不同樣本中?；撬釢舛炔町愝^大，對(duì)于未知樣本，建議挑選幾個(gè)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確保檢測(cè)結(jié)果處于標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于參考，每次實(shí)驗(yàn)都必須做一條新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

檢測(cè)范圍：0.1 mmol/L - 10 mmol/L

常見(jiàn)問(wèn)題解答：

Q1：試劑盒中的96孔板只有一個(gè)，不夠?qū)嶒?yàn)使用怎么辦？

A1：該試劑盒中的96孔板是免費(fèi)送的，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以用常規(guī)的96孔酶標(biāo)板代替，也可購(gòu)買(mǎi)愛(ài)必信配套的酶標(biāo)板（abs7064）。

Q2：試劑盒操作說(shuō)明書(shū)中既有標(biāo)準(zhǔn)曲線法又有公式法，我應(yīng)該選擇哪種計(jì)算方式？

A2：兩種方式任選一種就可以，公式是簡(jiǎn)便算法，建議按照標(biāo)曲計(jì)算，會(huì)更加準(zhǔn)確。需要注意的是，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，每次實(shí)驗(yàn)必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Q3：試劑盒一次用不完，最長(zhǎng)能保存多久？

A3：試劑盒中染料(Dye)溶解后易氧化變質(zhì)，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，不建議儲(chǔ)存。長(zhǎng)期儲(chǔ)存可能影響顯色讀數(shù)進(jìn)而影響檢測(cè)；如果樣本需要分批檢測(cè)，建議分批收樣儲(chǔ)存，待樣本收齊后統(tǒng)一檢測(cè)。此外，如因儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)久或其他人為原因?qū)е陆M分不夠使用，可與我司聯(lián)系單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)試劑盒組分。

引用文獻(xiàn):

[1] Li X, Yang J, Zhou X, et al. Ketogenic diet-induced bile acids protect against obesity through reduced calorie absorption. Nat Metab. 2024;6(7):1397-1414.

[2] Liu C, He P, Guo Y, et al. Taurine attenuates neuronal ferroptosis by regulating GABAB/AKT/GSK3β/β-catenin pathway after subarachnoid hemorrhage. Free Radic Biol Med. 2022;193(Pt 2):795-807.

[3]Xu Y, Xiao X, Ma C, et al. Epithelial NSD2 maintains FMO-mediated taurine biosynthesis to prevent intestinal barrier disruption. Clin Transl Med. 2024;14(12):e70128.

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