做腫瘤/纖維化EMT研究？mIHC染色指標這么選

更新時間：2025-12-08 點擊次數：201

在選擇上皮間質轉化（EMT）和間質上皮轉化（MET）的多重免疫組化（mIHC）染色指標時，核心原則是同時標記上皮細胞標志物、間質細胞標志物及關鍵調控因子，通過多指標共定位分析，直觀呈現細胞表型轉化的動態(tài)過程（如上皮標志物丟失、間質標志物獲得，或反之）。以下從指標分類、組合策略、注意事項三方面詳細說明：

一、核心指標分類：上皮標志物、間質標志物、調控因子

1. 上皮細胞標志物（核心功能：指示上皮表型完整性）

用于識別細胞是否保留上皮特性，EMT過程中通常表達下調或丟失，MET過程中重新上調或恢復。

標志物	特異性與應用場景
E-鈣黏蛋白（E-cadherin）	上皮細胞間黏附連接的核心蛋白，EMT的“金標準"標志物之一，幾乎所有上皮源性組織均適用（如乳腺、肺、結直腸等）。
細胞角蛋白（Cytokeratins, CKs）	上皮細胞骨架特異性蛋白，常用廣譜CK（如CKpan，覆蓋CK1/5/6/8/10/14/18/19）或組織特異性CK（如CK7/CK20區(qū)分消化道上皮），避免與間質細胞交叉反應。
緊密連接蛋白（Occludin/ZO-1）	上皮細胞緊密連接組分，反映上皮屏障功能，適合研究EMT對組織屏障的破壞（如肺上皮、腎小管上皮）。

2. 間質細胞標志物（核心功能：指示間質表型獲得）

用于識別細胞是否獲得間質特性，EMT過程中表達上調，MET過程中表達下調或丟失。

標志物	特異性與應用場景
波形蛋白（Vimentin）	間質細胞（成纖維細胞、內皮細胞、間充質細胞）骨架蛋白，EMT中較常用的間質標志物，與E-cadherin表達呈“負相關"，適合所有組織類型的EMT/MET檢測。
N-鈣黏蛋白（N-cadherin）	間質細胞（如成纖維細胞、平滑肌細胞）黏附蛋白，EMT中常與E-cadherin“切換表達"（E→N），尤其適用于腫瘤侵襲、轉移相關EMT（如乳腺癌、肺癌）。
α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）	肌成纖維細胞特異性標志物，適合研究“肌成纖維細胞樣EMT"（如肺纖維化、肝纖維化中的上皮細胞→肌成纖維細胞轉化）。
纖維連接蛋白（Fibronectin）	間質細胞外基質（ECM）成分，EMT中上皮細胞分泌增加，可輔助反映細胞外基質重構（如腎臟纖維化、腫瘤微環(huán)境）。

3. EMT/MET關鍵調控因子（核心功能：解釋表型轉化的分子機制）

用于定位調控EMT/MET的信號分子，明確“誰在驅動轉化"，通常與上皮/間質標志物共定位分析。

調控因子家族	代表分子	功能與應用場景
轉錄因子	Snail、Slug、Twist1/2	EMT核心轉錄抑制因子（直接抑制E-cadherin表達），腫瘤EMT、胚胎發(fā)育EMT的關鍵驅動因子，適合腫瘤侵襲前沿、纖維化病灶區(qū)域檢測。
生長因子受體	TGF-βRⅠ/Ⅱ、EGFR	上游信號受體（TGF-β是EMT經典誘導信號，EGFR促進腫瘤EMT），適合研究信號通路激活與EMT的關聯（如肺癌、結直腸癌）。
信號通路分子	β-catenin（核定位）	Wnt通路關鍵分子，核定位的β-catenin可激活EMT轉錄因子，適合檢測“上皮細胞中β-catenin核轉位"（如結直腸癌、肝癌）。

二、mIHC指標組合策略：按研究目標設計“3-4指標組合"

mIHC的優(yōu)勢是同時檢測多個指標，需根據研究對象（腫瘤/纖維化/胚胎發(fā)育）和核心問題（僅觀察表型？還是探究機制？）設計組合，避免指標過多導致信號重疊（通常一次檢測3-4個指標，選擇不同種屬來源一抗，搭配不同熒光素二抗）。

1. 基礎組合：僅觀察EMT/MET表型（無機制探究）

核心邏輯：上皮標志物 + 間質標志物（必選）+ 細胞定位對照（如DAPI染核），適合快速判斷“是否發(fā)生轉化"。

· 通用組合（所有組織）：E-cadherin（上皮）+ Vimentin（間質）+ DAPI
→ 結果判讀：正常上皮細胞僅E-cadherin+，間質細胞僅Vimentin+；EMT細胞同時表達兩者（“雙陽性"）或E-cadherin-、Vimentin+；MET細胞則相反。
· 腫瘤特異性組合：CKpan（上皮）+ N-cadherin（間質）+ DAPI
→ 優(yōu)勢：CKpan特異性識別腫瘤上皮細胞，避免與正常間質細胞混淆，適合腫瘤轉移灶的EMT檢測。
· 纖維化特異性組合：E-cadherin（上皮）+ α-SMA（肌成纖維細胞間質）+ DAPI
→ 適合肺/肝/腎纖維化中“上皮→肌成纖維細胞"轉化的檢測。

2. 進階組合：表型 + 機制探究（推薦）

核心邏輯：上皮標志物 + 間質標志物 + 調控因子 + DAPI，適合明確“調控因子是否驅動表型轉化"。

· 腫瘤EMT機制組合：E-cadherin（上皮）+ Vimentin（間質）+ Snail（調控因子）+ DAPI
→ 結果判讀：若Snail核陽性的細胞同時出現E-cadherin下調、Vimentin上調，提示Snail驅動該區(qū)域EMT。
· TGF-β通路相關組合：E-cadherin（上皮）+ α-SMA（間質）+ TGF-βRⅡ（調控因子）+ DAPI
→ 適合纖維化研究，判斷TGF-β受體激活是否與上皮→肌成纖維細胞轉化相關。

三、關鍵注意事項

1. 一抗種屬與熒光素匹配：
mIHC可以選擇相同種屬來源的一抗；染色順序遵循先弱后強的原則（如CKpan這種泛表達指標可以放較后一輪搭配波長最長的TSA染料）

2. 組織特異性調整：
- 避免選擇與組織背景交叉的標志物（如肝臟中，CK18特異性標記肝細胞，而CKpan可能與膽管上皮交叉，需優(yōu)先選CK18）；
- 間質豐富的組織（如肺、腎臟），可增加“內皮細胞標志物"（如CD31）排除內皮細胞干擾，明確Vimentin+細胞是否為EMT來源（而非正常內皮/成纖維細胞）。

3. 陽性對照與陰性對照：
- 陽性對照：已知發(fā)生EMT的組織（如腫瘤侵襲前沿、肺纖維化病灶）；已知MET的組織（如腫瘤轉移灶中分化較好的區(qū)域）；
- 陰性對照：正常上皮組織（僅上皮標志物+）、正常間質組織（僅間質標志物+），以及“一抗替代對照"（用同型IgG替代特異性一抗，排除非特異性染色）。

4. 結果量化指標：
僅觀察“陽性/陰性"不夠，需通過圖像分析軟件（如ImageJ、QuPath）量化：
- EMT細胞比例：（E-cadherin-Vimentin+細胞數 + E-cadherin+Vimentin+細胞數）/ 總上皮細胞數；
- 共定位系數：調控因子（如Snail）與間質標志物（如Vimentin）的共定位Pearson系數，判斷兩者是否協(xié)同表達。

綜上，EMT/MET的mIHC指標選擇需圍繞“表型識別（上皮 + 間質）+ 機制驗證（調控因子）"核心，結合研究對象調整組合，并嚴格控制對照與量化分析，才能準確反映轉化過程及分子機制。

小愛mIHC服務即染指標

組織	人（免費提供抗體使用）	小鼠（免費提供抗體使用）
T細胞	CD3、CD4、CD8、FOXP3、CD45、CD103、CD69	CD3、CD4、CD8、FOXP3、CD45、CD103、CD69
巨噬細胞	CD68、CD163、CD206、CD86、M-CSF、CD14、CSF-1R	F4/80、CD68、CD86、CD11b、CD163、M-CSF、CD206、CSF-1R
免疫檢查點	PD-1、PD-L1、HLA-DR、TIM-3、GZMB、CD24、LAG-3、B7-H3/CD276	GZMB、PD-1、PD-L1、TIM-3、LAG-3
神經細胞	IBA1、GFAP、NeuN	IBA1、GFAP、NeuN
成纖維細胞	α-SMA	α-SMA
腫瘤相關	Ki-67、PANCK、VEGF、SHP-2、Arginase-1、EGFR、TTF-1、MUC1、p63、p40、CDX2、PCNA、EPCAM、GST-π、HER2、CK7、CK8、CK18、CK5/6、CK20、GATA-3	SHP-2、Arginase-1、Ki-67、PANCK、PCNA、EPCAM、GST-π、EGFR、GATA-3
NK細胞	CD56、T-bet	NKR-P1C(NK1.1)、CD56、T-bet
B細胞（漿細胞）	CD20、CD21、CD23、CD19、CD24、CD80、CD138	CD20、CD21、CD23、CD19
內皮細胞	CD31、ICAM-1	CD31
間充質細胞	Vimentin	Vimentin
細胞因子	IL-4、IL-10、CXCL13、CCL2、TNF-α	TNF-α
中性粒細胞	CD66b、CXCR2、CD15	LY6G、CXCR1、CXCR2
樹突狀細胞	CD11b、CD11c	CD11b、CD11c
更多指標	Napsin A、Trem2	Arrestin-C、iNOS、Trem2

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一、核心指標分類：上皮標志物、間質標志物、調控因子