超越四聚體，從識別到“真殺傷”——腫瘤特異性T細胞檢測的全新高度

在腫瘤免疫研究與治療領域，什么樣的T細胞較有價值？不是“和抗原結合"的，而是真正“能殺死腫瘤"的那一群！愛必信（Absin）以全抗原納米顆粒為創(chuàng)新核心，推出更精準的效應型腫瘤抗原特異性T細胞（effector tumor antigen-specific T cells，ETASTs）檢測方案，直擊傳統(tǒng)方法的局限，讓功能讀出成為療效評估和基礎研究的新基石。

一、傳統(tǒng)檢測方法的痛點

1）MHC四聚體：

MHC四聚體通過抗原肽-MHC復合物識別TCR，雖具有高度特異性和經(jīng)典地位，但在臨床與基礎應用中存在根本性局限。

首先，TCR與MHC-肽復合物的“配對"僅代表潛在識別，并不能直接反映T細胞是否具備激活及殺傷功能——大量四聚體陽性群體實際上處于功能低下或耗竭狀態(tài)，缺乏真正的效應性。

其次，該方法受限于HLA型和指定少數(shù)表位肽庫，導致個體差異大、譜系覆蓋面狹窄，難以適用于復雜異質性腫瘤微環(huán)境。腫瘤相關表位極為多樣，而四聚體技術僅能檢測有限“已知靶點"，無法響應新生抗原、多肽表位或突變抗原。

并且技術上，四聚體制備和篩選流程繁瑣，成本高，限制了高通量和個體化檢測的推廣。更為重要的是，四聚體信號受TCR親和力、表面表達密度、與共刺激信號等多因素交互影響，信號強度未必等同于免疫效能，高比例的“假陽性"或“功能盲區(qū)"不利于預判治療效果。因此，MHC四聚體法在實際選出真正有抗腫瘤效應的T細胞時，準確性和臨床價值受到顯著挑戰(zhàn)。

2）功能檢測（如ELISPOT、ICS）：

功能檢測依賴短時體外刺激捕捉細胞因子/脫顆粒等信號，雖能提示應答存在，但與體內(nèi)殺傷效能與持續(xù)性并不等價。

首先，讀出為瞬時狀態(tài)且高度依賴刺激配方、濃度與時長，跨批次與閾值判定差異大，易致假陽性/假陰性。

其次，對抗原依賴強，多用已知肽池或非生理強刺激（PMA/ionomycin），既可能繞開TCR特異性，又難覆蓋新生抗原與復雜表位，導致反應被低估或失真。

其三，ELISPOT多為單/低通量指標，僅給頻次不反映單細胞強度；ICS需固定通透、細胞不可回收且面板補償復雜、背景升高，限制了表型-功能一體化分析與后續(xù)驗證。技術上，功能讀出與真正細胞毒性并不直接對應，常需結合CD107a、GzmB/Perforin或獨立殺傷實驗方可間接推斷。

并且在樣本學方面，低頻應答對細胞活性與APC/HLA條件極為敏感，TIL耗竭、冷凍復蘇或運輸延遲均顯著降低檢出率。

綜上，功能檢測更適合作為“是否被激活"的近端證據(jù)，難單獨甄別“真殺傷、可持續(xù)"的抗腫瘤T細胞，需與更接近真實抗原譜與功能狀態(tài)的策略聯(lián)合使用。

3）局限總結：

腫瘤因其抗原異質性高，單一表位方案天然“看不全"，假陰性導致易錯過潛在治療靶點；而單一功能結合導致很多標志陽性T細胞實際無殺傷力。

二、Absin創(chuàng)新方案的突破

全抗原納米顆粒技術：

基于腫瘤全抗原納米顆粒的Absin檢測策略以體外功能激活為核心，克服了上述不足。

首先，納米顆粒可高效負載腫瘤來源的完整抗原組，無需肽表位預設，較大程度復現(xiàn)真實腫瘤異質性和個體新生抗原背景，大幅提升檢測的廣譜性和靈敏度。

其次，該方法通過體外激活誘導T細胞真實表達功能型分子（如CD137、IFN-γ等），僅篩選出那些被腫瘤抗原激發(fā)、具備分泌、殺傷能力的活性T細胞，杜絕“表面陽性實質無效應"現(xiàn)象，檢測結果與免疫效應緊密正相關。

再者，全抗原納米顆粒法可跳開HLA限制，不依賴個體特異性復合物合成，極大簡化流程，適用于各類腫瘤患者以及多物種模型，高度便捷。

最后，該策略支持多分子流式標記、門控和功能分型，能動態(tài)量化應答強度，實現(xiàn)療效預測與伴隨診斷。

圖1：腫瘤組織全抗原納米顆粒，可以更真實全面的激活體內(nèi)ETASTs

三、基礎流程與易用性

1）外周血采集或組織消化獲取單細胞；

2）與全抗原納米顆粒共孵育，體外激活T細胞；

3）進行流式染色抗體分型，多分子門控分析激活狀態(tài)；

4）結果報告：即刻呈現(xiàn)實驗組與對照組“真效應"細胞的定量數(shù)據(jù)。

圖2：檢測流程簡圖——從樣本到功能

四、小結與常見問題

Q：這套方法檢測出來的T細胞比四聚體更多嗎？

A：能覆蓋更多抗原表位，且識別的是具有殺傷能力的功能型細胞。

Q：真能預測療效嗎？

A：多中心研究表明ETASTs水平與免疫治療應答密切相關，AUC可達0.95

Q：對樣本類型有什么要求？

A：外周血5 mL即可，多時點重復可追蹤動態(tài)趨勢。

本方案及產(chǎn)品限科研用途，不做臨床/個體診斷之依據(jù)

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...