WesternBlot（WB）即蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)，是將蛋白樣本通過聚丙烯酰胺電泳按分子量大小講蛋白分離，再通過電場力將蛋白轉(zhuǎn)移到雜交膜上。然后通過一抗/二抗復(fù)合物對靶蛋白進(jìn)行特異性檢測的方法。WB是進(jìn)行蛋白質(zhì)分析zui流行和成熟的技術(shù)之一。在WB過程中，分子量Marker就像個(gè)螺絲釘一樣，只是個(gè)小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。這個(gè)WB參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標(biāo)...

雞胚提取物它的K、Fe、Se礦物元素和維生素A、D、B2等含量也很高。這使得它不但具有補(bǔ)充這些營養(yǎng)素的作用，而且，還可能有一些保健功能。本試驗(yàn)用低硒飼料喂飼的小鼠4周后，各劑量組和低硒對照組動(dòng)物全血GPX活性抑制率30%，試驗(yàn)至8周末，低硒組血硒降低，全血GPX活性抑制率仍30%。說明硒營養(yǎng)不良動(dòng)物模型建立成功。而且，低硒組動(dòng)物的血硒、GPX活性保持在較低水平，顯示硒營養(yǎng)不良動(dòng)物模型穩(wěn)定。小鼠的腦、肝硒含量均降低(P0.05)，腦、腎、肝GPX也顯著性降低(P0.05)，而全...

免疫學(xué)三大工具，IHC、Westernblot、ELISA，分別用于定位，定性和定量!IHC（免疫組化）是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測的樣品...

使用牛垂體提取物工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn).對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是ClassII）操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。定期檢測下列項(xiàng)目，CO2鋼瓶的CO2壓力，CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和...

血清小知識血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出...

Q：步驟上的可選步驟能否省略？A：該試劑盒是經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的，再進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的時(shí)候?qū)嶒?yàn)室都是要做這個(gè)可選步驟的，建議不要省略，按照說明書操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么選？A：各5ul就可以了Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調(diào)？A：建議冰上操作，4℃是可以微調(diào)的。Q：beads出現(xiàn)吸不出來的情況，怎么處理？A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。Q：如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解...

1、血清封閉：組織切片上有剩余的位點(diǎn)可以與一抗非特異性結(jié)合，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性；因此需要使用封閉劑進(jìn)行封閉。常用試劑為血清和BSA等。封閉血清一般是和二抗同一來源的，但不能與一抗來源一致。2、一抗和二抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間：一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中zui重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時(shí)間與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，4度過夜（從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min）。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30m...

標(biāo)簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團(tuán)，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，進(jìn)而通過特異性標(biāo)簽抗體對其鑒定與純化，以達(dá)到研究的需求。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag標(biāo)簽—抗Flag標(biāo)簽抗體Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該...