CTF-LTM 2D熒光細胞活力檢測試劑盒

細胞活力檢測有多種方法，如檢測染料排除，ATP濃度變化，酶活性變化等。細胞檢測有時需要進行細胞毒性的機制研究和/或設(shè)立內(nèi)參對照，由此產(chǎn)生多重(multiplex) 分析需求，即對同一樣品用多種分析方法檢測，彼此檢測機理不同，相互不干擾，如此可以進行相關(guān)對比，從而揭示細胞毒性的機制或排除系統(tǒng)差異。國外 CellTiter Fluor （CTF）類產(chǎn)品就是基于這樣的原理設(shè)計的。本公司自行研發(fā)推出了同類的熒光細胞活力檢測試劑盒（Fluorescent Cell Viability Assay Kit），性能上與國外品牌產(chǎn)品無明顯差異。本產(chǎn)品是基于活細胞內(nèi)的蛋白酶對多肽-熒光基團底物產(chǎn)物的降解，產(chǎn)生熒光信號。細胞膜完整性受損時，該蛋白酶就失去了對底物的降解活性，不會產(chǎn)生熒光信號。CTF-LTM與熒光素酶試劑盒檢測原理不同，檢測方法也不同，其檢測靈敏度次于熒光素酶法，但是可以檢測到更早期的輕微的細胞損害，兩個檢測相容性好，可以進行multiplex 檢測。
產(chǎn)品特性：
1、性能
檢測信號，Window，靈敏度與特異性與國外品牌同類產(chǎn)品類似。
2、相容性
與CTG等常用分析試劑相容，不形成相互影響。
3、特征
對細胞早期膜損傷更敏感。
4、便捷
“加入-混合—溫育-檢測"，整個實驗步驟簡單，易操作。
產(chǎn)品組成：
蛋白酶底物，緩沖液混合后灌裝于 10 mL 或 100 mL 的棕色瓶中及 2 ml 管中，規(guī)格如下：

1、細胞準備：
（1）在 96 孔或 384 孔細胞培養(yǎng)板鋪合適密度的待檢測細胞。建議使用黑板（如與發(fā)光試劑聯(lián)合使用，可選擇白板）。
（2）準備待檢化合物。將合適濃度的待檢測化合物加到細胞板孔中。培養(yǎng)液中有機溶劑濃度保持在1～2%以下。設(shè)立未加化合物的對照組。根據(jù)項目需求繼續(xù)培養(yǎng)合適的時間。
2、細胞活力檢測：
（1）取出 CTF-LTM細胞活力檢測試劑，CTF緩沖液wan全溶解后平衡至室溫。CTF底物渦旋振蕩使其che底混勻，瞬時離心收集CTF底物至管底 。
（2）配制CTF反應(yīng)液：CTF底物為100x，根據(jù)用量用CTF緩沖液配成1x反應(yīng)液，充分混勻。
（3）取出待測細胞培養(yǎng)板，每孔加入等體積的CTF反應(yīng)液，例如100μl培養(yǎng)液加入100μl 1x CTF反應(yīng)液 。
（4）低速振板20 秒混勻，避光37 ℃ 反應(yīng)60min 后進行熒光檢測 。不同細胞對CTF底物切割速度不同，最佳讀板時間需根據(jù)細胞優(yōu)化。最快可以在加入試劑30分鐘后進行讀板。一般在60分鐘或更長時間后讀板的結(jié)果信噪比更高。建議讀板時間最長不超過3hr。
（5）在熒光讀板儀上讀取熒光信號，激發(fā)光Ex 380-400nm，發(fā)射光Em 505nm。
（6）根據(jù)需要，繼續(xù)進行下游的多重分析，例如Caspases 3/7 細胞凋亡檢測。

1、初次使用后建議將底物分裝-20℃保存，每次新鮮配制反應(yīng)液。
2、非經(jīng)嚴格驗證，不建議隨意改變反應(yīng)試劑用量。

-20℃及以下避光儲存，有效期12個月。